分子生物工具书之：核酸制备-DNA

▋ DNA 浓缩入门

人们如今对 DNA 的分析，上才会是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀有事件的分析来完成的，因此提高效率浓缩 DNA 非常重要。提高效率的分析产物是获得提高效率的中下游验证结果的必要状况。我们不能了解 DNA 浓缩系统的指导工作法则，然后针对在此之后应用选择最适合的化学全过程。

DNA 浓缩常见的挑战

● 裂解样品从而释放 DNA● 将 DNA 大分子与脂质、核糖体、糖类和 RNA 等其他大分子剥离● 持续保持 DNA 大分子的连续性

DNA 举例来说有所不同面临的挑战也有所不同。例如冰淇淋等肉类，其中的富含抑制性的氟化，如果这些氟化被已浓缩的 DNA 携带，则可能抑制中下游的验证。从革兰氏阳性微生物中的剥离 DNA 需要高效的裂解微生物厚厚的肽聚糖线粒体壁。一定要尽可能你用到的 DNA 浓缩方式能够解决取样面临的难题。

温馨提示：血液循环和组织取样在用到以后需冷冻保存，以大大减少核酸酶对 DNA 的摧毁。在抽出一小部分完成 DNA 浓缩之以后需将冻后的血液循环完全融合。

DNA 浓缩基本步骤

DNA 浓缩：裂解、为基础和浇

裂解：摧毁线粒体或组织-酶出口处理-工程学摧毁-去垢剂出口处理

裂解：使核糖体变性人或失去活性-碱金属去垢剂、加热、还原剂、尿素和胍类-蛋白酶（如蛋白酶 K）

裂解：使人体内核酸酶-过氧化（例如 EDTA）-蛋白酶（例如 蛋白酶 K）

为基础与浇：剥离 DNA-去掉其他核酸（如 RNA）-去掉核糖体 •有机分离出 •长芦析 •与固常与核酸为基础 -金属氧化物组分 -阴碱金属交换柱 -静电表层

为基础与浇：从其他线粒体物质中的剥离 DNA 的方式

■ 有机分离出

当苯酚或苯酚: 融合物与线粒体裂解物融合时，才会形成两常与：水常与和有机常与。极性 DNA 大分子进到极性常与或「水常与」，而变性人的核糖体和其他线粒体碎片则进到有机常与。

■ 长芦析

长芦可以让核糖体油脂，从而降较低其亲水性，然后变性人，变性人后的核糖体丧失有机酸从而沉淀；通过离心法去掉沉淀的核糖体和线粒体碎片。都用的长芦包括包括氯化钠、碳酸钾或碳酸铵。

■ 与固常与核酸为基础

绝大多数的 DNA 浓缩方式主要依据的法则是：通过选择性地与固常与核酸为基础, 从而从粗裂解物中的浓缩 DNA。这类固常与核酸包括金属氧化物核酸和阴碱金属交换树脂。上才会来说，用到固常与核酸浓缩 DNA 比其他方式用时更短、操作更捷径，因为不需要任何有机溶剂，而且可以微型化和自动控制从而充分利用高通量。

与 DNA 为基础的固常与核酸类型

金属氧化物组分：DNA 才会在高浓度离液长芦（例如长芦酸胍）发挥作用的情形与金属氧化物为基础，但是核糖体不才会。可以用到富含乙醇的浇液转化成长芦，然后在较低碱金属强度的溶液（例如 TE 或水）中的洗清 DNA。

阴碱金属交换柱：浓缩的主要法则是 DNA 中的带负电荷的磷酸基团与交换柱上带正电荷的大分子之间常与互作用。在较低长芦状况下，DNA 与核酸为基础，而核糖体和 RNA（取决所用的PH）则被浇转化成。DNA 可以用高长芦PH洗清。

在表层表层完成的 DNA 静电剥离：许多商品化试剂盒的指导工作法则是用到静电表层从溶液中的捕获 DNA。静电表层可以由金属氧化物等塑料作成，DNA 的为基础和洗清取决长芦浓度或 pH。

DNA 、浓度和连续性

正因如此的、完整的 DNA 对于许多中下游测定至关重要。都用评估 DNA 的都用方式是在 260nm 的无线电波出口处（DNA 在该无线电波下有远超过滴收峰）测定取样滴表面温度。通过测定 280nm 无线电波出口处的滴表面温度，并且近似值 260nm 与 280nm 出口处的滴表面温度之比，可以验证出浓缩全过程中的可能用到到的或湿气在取样中的的其他有机氟化。荧光染料和 qPCR 是近似值 DNA 浓度并未确定制品连续性的替代方式，主要在本指南在此之后关于核酸定量章节完成详细讨论。

图片举例来说：普洛麦格